人血红蛋白检测金标试纸条法（GA 765-2008）

1   范围

本标准规定了法医生物物证检验中通过金标试剂条快速检验人血红蛋白（Hb）的检验原理、材料准备、操作方法、结果判定和检验中的注意事项。

本标准适用于从事法庭科学检验中检验鉴定的检材是否含有人血红蛋白的检测。

2   规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682—2008  分析实验室用水规格和试验方法

 GA 476 人血红蛋白金标检验试剂条

3   原理

抗人血红蛋白金标试剂条的基本原理是金标记双抗体夹心法。

抗人血红蛋白金标试剂条分为三个区，即加样区、反应区和吸附区。吸附在加样区的金标记单克隆抗人血红蛋白抗体与人血痕浸泡液（含有人血红蛋白）反应后，形成金标记抗原抗体复合物，并向试剂条吸附区扩散，当复合物扩散至反应区时，与吸附于此区的另一单克隆抗人血红蛋白抗体结合（线状），抗原抗体复合物聚集该处，形成紫红色线（阳性反应线）。过剩的复合物继续向吸附区扩散，与反应区吸附的另一抗体（通常是羊抗鼠IgG）结合，也形成紫红色线条（质控线）。

如果浸泡液不含有人血红蛋白，则加样区就不能形成抗原抗体复合物，扩散至反应区的金标抗人血红蛋白抗体就不能与吸附于此区的另一单克隆抗人血红蛋白抗体结合，也就没有紫红色线状带形成。当它继续向吸附区扩散，可与反应区另一吸附的羊抗鼠IgG结合，形成紫红色线条（质控线）。

4   试剂与器材

4.1  试剂

试剂包括：

a) 人血红蛋白金标检验试剂盒（符合GA 476的各项要求）；

b) 纯水（符合GB/T 6682—2008中规定的三级水）。

4.2 器材

    器材包括：a) 眼科剪；b) 眼科镊；c) 泪囊穿刺针；d) 加样器及加样器头；e) 1.5mL～2mL离心管；f) 高速离心机。

5  操作步骤

5.1  检材处理

5.1.1  取适量怀疑含有人血红蛋白的检材或适量怀疑是人的血液，放入1.5mL～2mL离心管中，加入约0.5mL纯水。

5.1.2 用泪囊穿刺针搅动检材，加速检材的溶解；或置于振荡器上振荡，浸泡约30min。

5.1.3 将此离心管置于高速离心机上，13000rpm 离心5min 。

5.1.4 离心后将上清液移入另一个1.5mL～2mL离心管中。

5.1  检测

5.2.1  将试剂盒剪开，取出检验试剂条，将试剂条上带有MAX标记一端插入上清液中并计时,或将适量检材浸泡液滴加到试纸条吸附区。

5.1.1 约5min 后取出试剂条，观察结果。

6 结果判断

当检测线为紫红色，质控线也为紫红色，则说明浸泡液中含有人血红蛋白；当检测线未出现紫红色，质控线为紫红色，则说明浸泡液中无人血红蛋白；当检测线和质控线均未出现紫红色，说明此试剂条无效，应换试剂条重新检验。结果判断示意图见图1。

7 注意事项

7.1  检验鉴定中应做已知样本的阳性对照和空白处的阴性对照。

7.2  检验鉴定时检材的剪取量、浸泡检材用纯水量以及浸泡时间应视情况而定。检材陈旧浸泡时间应延长，或浸泡过夜。同时也应避免检材量太多，浸泡液过浓。如果检材量少，可采用小离心管，加少量水浸泡。

7.3  如果案件现场检材条件较好，可不进行震荡器振荡和离心机离心。

7.4  置于浸泡液中，不应超过MAX线。

7.5  阳性对照和阴性对照均正确时，检材结果判定有效。

7.6  试剂盒应保存在阴凉干燥处，在有效期内使用。从较低温度取出试剂盒，在检验前应置室温一段时间再使用。

7.7  试剂盒包装破损、试剂条有折痕等现象，应另取试纸条进行检验。